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临床FFPE核酸提取试剂盒的操作中哪些更有利于正确结果
发布日期：
2019-03-18
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3848
临床FFPE核酸提取试剂盒为从经福尔马林固定石蜡包埋组织（简称FFPE）中提取DNA提供一种高质量、快速、的方法。本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和*的缓冲液系统?？纱笙薅热コ又实鞍准跋赴衅渌谢衔铩Ｊ褂帽臼约梁刑崛NA无需用二甲苯去蜡，操作简单、安全。提取所得的DNA可直接应用于PCR等下游实验。
1.将石蜡样品切成5-10μm厚的切片。注意：若石蜡块保存于室温，则弃去起始的2~3片切片。切片厚度以5μm为佳，适当去除无组织的蜡质可提高提取效率。
2.将4-8片切片置于1.5-mL离心管中（自备），加入300μL除蜡液DB。
3.将离心管置于80℃孵育30min，期间10min后取出短暂涡旋混匀。
4.于室温冷却2-3min，加入10μL的蛋白酶K，涡旋混匀，55℃孵育30-60min至无明显组织块。（视组织量的多少，可酌情减少或增加孵育时间。）
5.13,000rpm离心1min。用枪头小心刺穿液面表层蜡膜，取下层清液至新的1.5-mL离心管中（自备）。
注意：切勿吸到上层浑浊蜡层，否则石蜡可能对DNA纯度有影响。
6.加入400μL裂解液LB，颠倒混匀，室温静置10min。
7.加入800μL无水乙醇，涡旋10sec。
8.将吸附柱置于2-mL收集管中，再将上述液体转移至吸附柱中，每次加入750μL，13,000rpm离心1min，弃收集管中的滤液。
9.重复步骤8，直至将所有溶液都经过吸附柱过滤，弃滤液。
10.向吸附柱中加入已用无水乙醇配制的洗涤液WB1500μL，13,000rpm离心1min，弃废液。
11.将吸附柱重新放回2-mL收集管中，加入600μL洗涤液WB2，13,000rpm离心1min，弃废液。
12.重复步骤11两次。
13.将吸附柱重新放回2-mL收集管中，于室温13,000rpm空柱离心1min后，置于新的1.5-mL无核酸酶污染的离心管中?？鞘椅戮仓没虺还ぷ魈ǚ绺?min，以*挥发残余的乙醇。
注意：残留的乙醇可能会影响后续的PCR等实验。
14.向吸附柱柱膜中央上方小心加入35-100μL无核酸酶污染的纯水（此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜，纯水经65℃温浴后再加入有助于提高洗脱效率），室温静置3-5min，13,000rpm离心1min，洗脱液即为DNA溶液。（建议：为提高DNA浓度，可将洗脱液重新加回柱膜中央，静置3min后，以13,000rpm离心1min洗脱DNA。）
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